Né à Atlanta en Géorgie, dans une famille d'artistes, Spike Lee suit les cours du collège Universitaire de Morehouse, puis entre à l'école de cinéma de New York, où il réalise ses premiers courts métrages : THE ANSWER et SARAH. Il y obtient l'Oscar du Meilleur Film d'Etudiant pour JOE'S BED-STUY BARBERSHOP, qui remportera un succès considérable dans plusieurs grands festivals : Montréal, Rotterdam, Losa Angeles, San Fransisco, et connaîtra de nombreuses diffusions télévisées.

Après un premier projet de long métrage : MESSENGER, abandonné faute de capitaux, Spike Lee écrit le scénario de SHE'S GOTTA HAVE IT (Nola Darling n'en fait qu'à sa tête), comédie de moeurs qu'il réalise et interprète en douze jours avec une petite équipe hautement motivée. Ce film, le premier consacré à la moyenne bourgeoisie noire de Brooklyn, sera primé dans plusieurs manifestations et remportera notamment le Prix de la jeunesse au Festival de Cannes.

Spike Lee écrit, réalise et interprète ensuite la comédie musicale SCHOOL DAZE, une satire de l'assimilation et des "fraternités" universitaires noires qui sera le plus grand succès commercial de la Columbia en 1988.

Un an plus tard, il écrit, réalise et interprète DO THE RIGHT THING, pamphlet anti-raciste pour lequel il est cité à l'Oscar du meilleur scénario et au prix de la mise en scène de la Los Angeles Film Association.

En 1990, il signe MO' BETTER BLUES, avec Denzel Washington et Wesley Snipes, que suivront JUNGLE FEVER, avec Wesley Snipes et Annabella Sciorra, une ample et ambitieuse biographie de MALCOM X, la comédie autobiographique CROOKLYN, le drame réaliste CLOCKERS d'après le roman de Richard Price, et Girl 6.

Spike Lee réside depuis l'enfance à Fort Greene (Brooklyn), où sont installés les bureaux de sa société de production, 40 Acres and a Mule, sa société de disque 40 Acres and Mule Musicworks et sa boutique Spike's Joint. (Une succursale californienne de celle-ci a été fondée depuis à Los Angeles).

Il a produit et réalisé des vidéo-clips pour des artistes comme Miles Davis, Public Enemy, Anita Baker, E.U., Tracy Chapman, Steel Pulse, Phylliss Hyman, Naughty by Nature, Arrested Development et Prince; plusieurs films de la érie "Art Spot" pour MTV; un court métrage avec Branford Marsalis et la chanteuse Diahnne Abbott pour l'émission "Saturday Night Live".

Depuis 1988, il a également tourné de nombreux spots publicitaires, notamment pour Nike Air Jordan (avec michael Jordan), American Express, Taco Bell et les jeans Levi's Button-Fly 501.

Acteur dans chacun de ses films, il a également publié les récis de cinq de ses tournages, ainsi qu'un livre de photos sur ses cinq premiers films : "Five for Five".

On le retrouvera pour THE JACKIE ROBINSON SAGA, une biographie du légendaire joueur de basball qui fut le premier noir à intégrer la "Major League".